Ang isang espesyal na tren na tumatakbo mula sa Antarctica hanggang sa gubat ay maaaring tumigil na umiiral, at ang dahilan ay dahil sa pagkasira ng mga track ng riles. Ang mga hayop, natatakot na mawala ang nag-iisang transportasyon na nagpapahintulot sa kanila na maglakbay, lumiko sa Diego para sa tulong sa Go Diego Go! Riles ng Railroad ni Diego. Ang batang lalaki ay handa nang tumulong, na kinasasangkutan ka sa pagpapatupad ng kanyang plano. Ito ay nagsasangkot sa pag-aayos ng kalsada, ngunit kailangan mo munang ilagay ang lahat ng mga hayop sa mga karwahe. Sumasang-ayon ang mga pasahero na maglakbay lamang sa kumpanya ng kanilang sariling uri, kaya mayroong isang hiwalay na karwahe para sa mga penguin, usa, oso, at iba pa. Kapag inilagay ang lahat ng mga hayop, sisimulan ng tren ang paglalakbay nito at bago ang bawat paghinto ay dapat mong tipunin ang kalsada tulad ng isang palaisipan sa pamamagitan ng pag-on ng mga indibidwal na seksyon sa Go Diego Go! Riles ng Railroad ni Diego.
